Transfer energi resonansi fluoresensi (FRET)
Transfer energi resonansi fluoresensi (FRET) minangka proses transfer energi non-radiatif ing ngendi energi negara bungah donor ditransfer menyang negara bungah akseptor liwat interaksi pasangan listrik antarmolekul.Proses iki ora nglibatake foton lan mulane non-radiatif.Assay iki nduweni kaluwihan yaiku cepet, sensitif lan prasaja.
Pewarna sing digunakake ing tes FRET bisa padha.Nanging ing umume aplikasi, pewarna beda digunakake.Secara ringkes, transfer energi resonansi luminous yaiku transfer sepasang dipol saka donor (pewarna 1) menyang akseptor (pewarna 2) nalika klompok donor bungah.Umumé, spektrum emisi gugus fluorofor Donor tumpang tindih karo spektrum panyerapan gugus Akseptor."Yen jarak antarane rong fluorofor cocog (10 - 100 A), transfer energi fluorofor saka donor menyang akseptor bisa diamati."Cara transfer energi gumantung saka struktur kimia reseptor:
1. Diowahi dadi getaran molekul, yaiku, cahya sing padhang transfer energi ilang.(Reseptor minangka pemadam cahya)
2. Emisi luwih kuat tinimbang reseptor kasebut, nyebabake owah-owahan abang ing spektrum fluoresensi sekunder.(Reseptor minangka pemancar cahya).
Klompok donor (EDANS) lan gen akseptor (DABCYL) digandhengake kanthi seragam menyang substrat alami protease HIV, lan nalika substrate ora pedhot, DABCYL bisa ngilangi EDANS lan banjur ora bisa dideteksi karo fluorine.Sawise pedhot protease HIV-1, EDANS ora dipateni maneh dening DABCYL, lan EDANS luciferases bisa dideteksi.Kasedhiya inhibitor protease bisa dipantau kanthi owah-owahan intensitas fluoresensi EDANS.
Peptida FRET minangka alat sing trep kanggo nyinaoni nonspesifik peptidase.Amarga proses reaksi kasebut bisa terus dipantau, mula menehi cara sing trep kanggo ndeteksi aktivitas enzim.Kilap sing diasilake sawise hidrolisis ikatan peptida dening donor / akseptor nyedhiyakake ukuran aktivitas enzim ing konsentrasi nanomolar.Nalika peptida FRET utuh, iku nuduhake ilang dadakan saka lampu kilat internal, nanging nalika sembarang ikatan peptida ngelawan donor / akseptor break, nerbitaké lampu kilat, kang bisa dideteksi terus-terusan lan aktivitas enzim banjur bisa diukur.
Wektu kirim: Aug-14-2023